色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
如果你遇到基線漂移，知道是什么問(wèn)題嗎？漂移問(wèn)題主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。
1基線漂移
一般說(shuō)來(lái)，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，但是，如果你在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：
①紫外燈能量不足。
解決方法：
更換新的紫外燈；
②柱溫波動(dòng)。
解決方法：
控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。
③流通池被污染或有氣體。
解決方法：
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(最好斷開(kāi)柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
④流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。
解決方法：
檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
⑤樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K'值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。
解決方法：
使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
⑥檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。
解決方法：
將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處；
⑦流動(dòng)相的pH值沒(méi)有調(diào)節(jié)好。
解決方法：
加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值；
2保留時(shí)間漂移
保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s，超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無(wú)法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：
①溫控不當(dāng)。
解決方法：
調(diào)好柱溫，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。
②流動(dòng)相比例變化。
解決方法：
檢查四元泵的比例閥是否有故障。
③色譜柱沒(méi)有平衡。
解決方法：
在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。
④流速變化。
解決方法：
重新設(shè)定流速。
⑤泵中有氣泡。
解決方法：
從泵中除去氣泡。
3峰型異常問(wèn)題
峰型問(wèn)題是液相的主要問(wèn)題，在做液相過(guò)程中，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對(duì)于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對(duì)待，從主要問(wèn)題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。
①所有峰均為寬峰。
解決方法：
系統(tǒng)未達(dá)到平衡；
溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；
色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；
色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；
溫度變化造成的影響。
②所出峰比預(yù)想的小。
解決方法：
樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測(cè)器設(shè)置不正確，定量環(huán)體積不正確；檢測(cè)池污染；檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題。
③色譜圖中未出峰。
解決方法：
系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；
泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；
檢測(cè)器設(shè)置不正確；
針對(duì)以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。
④一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰。
解決方法：
流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
⑤所有峰均為負(fù)峰。
解決方法：
信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒；
光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰。
解決方法：
進(jìn)樣量過(guò)大；樣品濃度過(guò)高；
保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；
保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；
柱塌陷或形成短通道。
⑦前伸峰。
解決方法：
進(jìn)樣量或樣品濃度高；
溶解樣品的溶劑較流動(dòng)。
